Q 使用試劑盒分離外泌體會不會是外泌體融合,如果外泌體融合,該如何解決?查看詳情
A通過沉淀試劑盒會使外泌體聚集在一起,但是外泌體之間不會出現(xiàn)融合的現(xiàn)象,可以用1×PBS溶解外泌體沉淀物,充分震蕩混勻即可。
Q 純化的外泌體如何保存?查看詳情
A短時間內使用,可在2-8℃保存一周左右,若長時間保存,建議放在-80℃冰箱中,避免反復凍融,另外,最好是使用低吸附蛋白的保存管來保存。
Q 如何鑒定提取的外泌體?查看詳情
A外泌體是體細胞分泌的細胞外囊泡群體中一種,直徑一般為30-150nm,通常確定外泌體一般需要三個條件:電鏡形態(tài)觀察,顆粒粒徑測定和蛋白標志物檢測(Western Blot檢測CD9,CD81,CD63,Alix,TSG101等)。
Q 外泌體和微囊泡有什么區(qū)別?查看詳情
A外泌體(30-120nm)的直徑比微囊泡(120-1000nm)小,最主要是它們產生機制不同,外泌體主要來源于細胞內溶酶體微粒內陷形成的多囊泡體,經多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質中,而微囊泡是細胞釋放到胞外的膜性囊泡,也含有蛋白質、脂類和核酸等分子。
Q 如何測定外泌體中的蛋白質濃度?查看詳情
A測定外泌體中的蛋白質濃度用BCA或者Bradford方法,測定前外泌體需要經過裂解處理。
Q 細胞死亡會影響外泌體分泌嗎?查看詳情
A細胞死亡或凋亡會影響外泌體的分泌,死亡/凋亡的細胞會釋放大量大小不等的囊泡,從而污染外泌體,所以我們建議用健康細胞去研究外泌體。另外,凋亡細胞分泌的是凋亡小體,不是外泌體。